Cultivo de células mãe limbares em membrana amniótica para reconstrução de tecido corneano: uma comparação de dois métodos

Resumo

Objetivo: Obter um cultivo celular de células do limbus corneano em membrana amniótica como suporte por dois métodos diferentes, suspensão e explante, para obter dados de confluência, viabilidade e diferenciação em ambos métodos.

Métodos: Mostras de LSC (limbal stem cells, por suas siglas em inglês) foram obtidas de 16 doadores cadavéricos. Realizaramse seis cultivos de cada mostra, 3 pelo método de suspensão e 3 pelo método de explante, tudo por triplicado. Como controle negativo se utilizou membrana amniótica sem LSCs. As células foram cultivadas com SHEM, 37°C, 5% CO2 e 95% de umidade. Os cultivos foram mantidos por 14 dias com uma troca de meio cada 3 dias. O dia 14 os cultivos foram analisados para avaliar viabilidade com azul de tripan, confluência por microscópio e a diferenciação celular com Imunoistoquímica para detectar citoqueratina 3/12.

Resultados: Como resultado dos experimentos mencionados anteriormente, para os métodos de suspensão e explante, encontrou-se uma viabilidade de 98.92% e 98.32%, uma confluência de 55.95% e 48.27%, uma concentração celular de 38.83x104 células/ml e 36.484x104 células/ml, e uma diferenciação de 22.935% e 16.558%, respectivamente.

Conclusão: Ainda que este estudo compare dois métodos, cultivos em suspensão de LSC e cultivo em explante de LSC, ambos com membrana amniótica como suporte, nós encontramos uma pequena diferença neles. Como resultado, o cultivo em suspensão foi melhor do que o explante, no entanto os resultados não são conclusivos, portanto é necessário realizar mais investigações neste campo para conseguir uma conclusão com respeito ao desempenho destes dois métodos.